Антиген сапной цветной для пластинчатой реакции агглютинации инструкция

Антиген сапной цветной для пластинчатой реакции агглютинации

Состав

Антиген сапной цветной для пластинчатой реакции агглютинации  состоит из инактивированной нагреванием культуры Burkholderia mallei, окрашенной бенгальским розовым и суспензированной в молочнокислом буферном разбавителе.

Назначение

Препарат предназначен для серологической экспресс–диагностики сапа в пластинчатой реакции агглютинации.

Применение

Антиген используется в соответствии с инструкцией по применению.

Форма выпуска

Препарат расфасовывают во флаконы вместимостью 10 см³ по 333 дозы (10 см³). В коробке 10 флаконов.

Хранение

Срок хранения – 2 года с даты выпуска. Препарат хранят и транспортируют в сухом темном месте при температуре от 2 °С до 8 °С. Допускается транспортирование антигена в упаковке организации-производителя при температуре не выше 25 °С в течение не более 15 суток.

Руководитель:

Рыжов Михаил Викторович  

8 909 239 00 88

Коммерческий директор:

Прокопов Дмитрий

Александрович       

8 905 158 75 00

Белгородский регион                         

Тарасиков Виталий (КРС)                 

8 960 640 13 99

Липецкий регион                               

Москвитин Игорь                                   

8 903 877 40 06

Воронежский регион                           

Свешникова Екатерина                         

8 950 870 40 77

Брянский регион                               

Михайлов Юрий                                   

8 960 675 94 00

Прокопов Дмитрий                                 

8 905 158 75 00

Орловский регион                               

Рыжов Владимир                                   

8 951 330 33 48

Курский регион                                   

Михайлов Юрий                                     

8 960 675 94 00

Рыжов Михаил                                     

8 909 239 00 88

Рязанский регион                                

Москвитин Игорь                                     

8 903 877 40 06

Калужский и Тульский регионы 

Рыжов Владимир 

8 951 330 33 48

Технический специалист

по кормлению КРС 

Абдулин Алексей 8 951 332 03 31

Специалист по кормлению ООО «ТехКорм»

Новиков Сергей  8 910 466 72 20

Независимый консультант по свиноводству и птицеводству

Василаки Игорь Андреевич 8 980 370 15 15

Антиген предназначен для применения в пластинчатой реакции агглютинации для выявления противосапных агглютининов в сыворотке крови животных и таким образом иммунодиагностики сапа.

Штамм Pseudomonas mallei №5584 применяется для изготовления противосапных диагностикумов (Инструкция по изготовлению и контролю антигена сапного для реакции связывания комплемента, утв. ГУВ МСХ СССР 17.08.84).

Пример 1. Для изготовления антигена культуру возбудителя сапа штамма Pseudomonas mallei № 5584 выращивают на синтетической питательной среде Сотона, инактивируют прогреванием при температуре 90-100°С в течение 1 ч. Бактерийную массу отделяют центрифугированием, осадок промывают дистиллированной водой, центрифугируют и суспендируют в физиологическом растворе с 0,5% фенола.

Определяют концентрацию клеток во взеси в международных единицах мутности (MEM) по стеклянному единому стандарту мутности для бактерийных взвесей, подсчитывают количество клеток в 1 мл из расчета, что 10 MEM составляют 1,65 млрд/мл.

Для окрашивания, клеток используют раствор органического красителя на дистиллированной воде. Количество красителя, необходимое для окрашивания полученной массы клеток, определяют титрованием. Взвесь клеток возбудителя Pseudomonas mallei с установленным количеством красителя выдерживают при температуре 20-25°С, затем отделяют жидкость центрифугированием, осадок ресуспендируют в буферном растворе следующих образцов:

рН 3,0-4,0 (120,0-350,0 г молочной кислоты, 18,0-22,0 г гидроокиси натрия, 4,5-5,5 г фенола, 8,0-9,0 хлорида натрия, дистиллированной воды до 1л).

Образцы испытаны в РА с позитивной сапной сывороткой из расчета содержания в 1 мл 50-170 млрд микробных клеток.

Получают следующие серии антигена:

Продолжение таблицы

0

0

5

0

Пример 2. Для диагностики сапа одну :саплю сыворотки крови животного смешивают с одной каплей антигена на белой эма- лированной пластинке с лунками и учитывают реакцию в течение 4 мин. При наличии противосапных агглютининов в те- 5 чение 0,5-4 мин в лунке происходит образование окрашенных хлопьев агглютинина различной окраски в зависимости от используемого красителя, жидкость просветляется. Окрашенные образцы антигенов испытывают в пластинчатой РА с позитивной сапной сывороткой. Во всех случаях наблюдался крупный агглютинат, соответствующего цвета с полным просветлением жидкости в лунке. При испытании образцов с негативной сывороткой реакции не наблюдалось.

Пример 3. Проводят проверку видовой специфичности антигена I, II и III серий испытанием его с сывороткой крови 420 лошадей благополучных по сапу хозяйств разных районов страны, а также с гипериммунными поливалентными сыворотками разных серогрупп и вариантов: О- и Н-саль- монеллезными, лептоспирозными, 0-коли 5 сыворотками, сибиреязвенной, листери- озной, противорожистой, псевдомоноз- ной, бруцеллезной,туберкулезной,овисной и др.

Во всех случаях при наблюдении за реакцией в течение 4 мин получены отрицательные результаты, указывающие на высокую степень видовой специфичности антигена, Слабые признаки агглютинации проявляются при выдерживании смеси антигена с некоторыми сыворотками более 4 мин.

Положительный результат получен при испытании антигена с мелиоидозной сывороткой в течение 0,5-4 мин, что объясняется очень близкой антигенной структурой возбудителя сапа и мелиоидоза.

Пример 4. Чувствительность реакции агглютинации с цветным сапным антигеном определяют при исследовании 2535 проб сыворотки крови лошадей в стране, неблагополучной по сапу. Животных одновременно обследуют на сап двукратной внутрикожной маллеиновой пробой и клиническим осмотром, кровь исследуют в РСК с сапным антигеном для РСК.

0

5

0

5

Результаты исследования представлены в таблице.

Из полученных данных следует, что РА с заработанным антигеном в сравнении с PC К выявляет вдвое большее количество ло иэдей, зараженных возбудителем сапа (ее ответственно, 4.6 и 2,2% к числу обследо- шых), а также определенное количество животных, которые по результатам приме- няощихся методов исследования считают- ся здоровыми.

Пример 5. Проводят проверку актив- ноЬти антигена испытанием его с гиперим- м иными сапными сыворотками при температуре 4-6 и 20-25°С. В течение 0,5-

пин появились практически равноценные положительные реакции при обеих темпера гурах во всех разведениях сывороток, что

го ти сорых температурах.

Использование пластинчатой реакции

орит о возможности использования ан- ена для постановки РА при любых плю-

аг в

лютинации с цветным сапным антигеном етеринарной практике позволяет првыСУТЬ эффективность экспресс-диагностики бслезни, расширить ассортимент высокоэффективных диагностикумов, пригодных к использованию в лабораторных и полевых условиях.

Формула изобретения

Антиген для диагностики сапа, содержащий клетки возбудителя Pseudomonas mallei в разбавителе, отличающийся тем, что, с целью повышения активности и специфичности, из клеток возбудителя он содержит окрашенные клетки штамма Pseudomonas mallei № 5584, а в качестве разбавителя — буферный раствор, включающий молочную кислоту, гидроокись натрия, хлорид натрия и фенол в дистиллированной воде, с рН 3,0-4,0 при следующем соотношении компонентов:

Окрашенные клетки штамма .

Pseudomonas mallei

tvfe 5584

Молочная кислота Гидроокись натрия Хлорид натрия Фенол

(50-170)х хЮ9 кл/мл 120-350 г 18-22 г 8,0-9,0 г 4,5т5,5 г

Дистиллированная вода До 1 л.