Инструкция определения группы крови цоликлонами

Регистрационные удостоверения

Определение групп крови цоликлонами осуществляется в реакции агглютинации. Цоликлоны представляют собой солевые растворы моноклональных антител для обнаружения антигенов эритроцитов человека. Каждый реагент строго специфичен соответствующему антигену. Моноклональные антиэритроцитарные антитела продуцируются гибридомами мыши или гетерогибридомами человек-мышь.

Методика проведения анализа

Алгоритм определения группы крови AB0 и резус-фактора цоликлонами облегчает и стандартизирует процедуру типирования. Позволяет однозначно интерпретировать результат реакции антиген/антитело. Для каждого исследования по системе AB0 достаточно одной серии реагентов. Объект исследования – цельная кровь, эритроцитарная масса, отмытые эритроциты, клетки крови в сыворотке или физрастворе.

В качестве примера приводим схему проведения типирования крови человека по системе антигенов AB0.

Характерное отличие AB0 от других систем – постоянное наличие в сыворотке здоровых людей антител к антигенам, которые отсутствуют на эритроцитах. Естественные Анти-A и Анти-B антитела относятся к иммуноглобулинам класса M. Выработанные в результате иммунизации антигеном A и B иммунные антитела – иммуноглобулины класса G. Анти-A и Анти-B антитела в сыворотке большинства людей – это смесь иммуноглобулинов M и G.

1. Обеспечьте яркое освещение помещения и температуру воздуха 15 – 25 °C.
2. Промаркируйте лунки планшета: Анти-A, Анти-B, Анти-AB.
3. Добавьте в подписанные лунки по одной капле (приблизительно 0,1 мл) реагентов Анти-A, Анти-B, Анти-AB.
4. Поместите по одной маленькой капле концентрированной эритроцитосодержащей среды (0,01 – 0,03 мл) рядом с большой каплей каждого реагента.
5. В каждой из трех лунок отдельной стерильной стеклянной палочкой смешайте моноклональный реагент с кровью.
6. Плавно покачивайте планшет 2,5 – 3 минуты. Обычно агглютинация формируется в течение 5 – 10 секунд. Запас времени необходим для обнаружения слабых вариантов антигенов.
7. Проведите визуальную оценку результатов реакции в каждой лунке. Результат реакции свидетельствует об обнаружении соответствующего агглютиногена.

Результаты реакции

Таблица результатов типирования крови с помощью цоликлонов.

«+» — положительный результат реакции;
«-» — отсутствие агглютинации.

• Отрицательный результат реакции во всех трех лунках свидетельствует об отсутствии агглютиногенов. Группа: 0(I).
• Агглютинация с Анти-A и Анти-AB говорит о наличии агглютиногена A. Групповая принадлежность: A(II).
• Реакция в лунках с Анти-B и Анти-AB указывает на наличие антигена B. Групповая принадлежность: B(III).
• Реакция во всех трех лунках говорит о присутствии обоих антигенов. Группа: AB(IV).

Методика проведения исследования с помощью цоликлонов требует обязательного подтверждения результатов реакции выявлением агглютининов α и β стандартными эритроцитами.

Алгоритм определения резус-фактора представлен в соответствующей статье.

Список литературы

• Рагимов, А.А. Трансфузионная иммунология/А.А. Рагимов, Н.Г. Дашкова. — М.: Медицинское информационное агентство, 2004. — 279 с.
• Шевченко, Ю.Л. Безопасное переливание крови/Ю.Л. Шевченко, Е.Б. Жибурт. — СПб.: Питер, 2000. — 308 с.
• Минеева, Н.В. Группы крови человека. Основы иммуногематологии — СПб.: Издательско-полиграфический комплекс «Гангут», 2020. — 360 с.

Патенты

Свою группу крови, так же, как и резус-фактор, должен знать каждый человек. Это необходимо, в первую очередь, для собственной безопасности. Ведь никто из нас не застрахован и неизвестно что может приключиться с нашей жизнью в будущем. Знание группы крови позволит в необходимый и ответственный момент добиться быстрого переливания, которое может спасти жизнь.

Помните о том, что ни один врач не будет совершать инфузию крови без знания ее группы и резуса. Данная процедура может понадобиться в случае, если произошло ДТП, травма или еще какой – то неприятный случай, сопровождающийся повреждением целостности кожных покровов и, вследствие чего произойдет кровотечение.

Очень важно в такие моменты немедленно начать переливание, так как каждая минута здесь на вес золота. Чем скорее начнется процедура, тем вероятнее, что она пройдет без дальнейших осложнений для здоровья человека. Это касается неотложных случаев, но существуют и такие моменты, когда знание группы необходимо не срочно.

Это такие ситуации как: планирование проведения оперативного вмешательства, если вы хотите стать донором крови для кого – то, при наступлении беременности, для постановки на военный учет, при планировании беременности, для определения отцовства.

Во всех этих случаях, а также если вы хотите удовлетворить собственное любопытство необходимо сдавать кровь на определение ее группы и резуса. Существует несколько методов, с помощью которых можно узнать эту информацию. Это определение группы с помощью сывороток или при помощи использования цоликлонов. Последний метод является наиболее популярным, так как имеет несколько преимуществ, именно его мы и рассмотрим.

Что это за метод?

Прежде всего необходимо разобраться, что же представляет собой метод определения группы крови при помощи цоликлонов. И здесь мы сразу же сталкиваемся с новым словом, которое, скорее всего, ранее не слышали.

Цоликлоны, что это такое? Это специальный раствор антител, который связывается на поверхности эритроцитов с антигенами. Таким образом, происходит биохимическая реакция, в ходе которой врачи могут узнавать всю необходимую информацию по поводу группы крови или резус-фактора пациента.

Преимущество метода с цоликлонами в том, что в отличии от такового с сыворотками, с его помощью можно сразу же узнать и резус-фактор.

Стоит сразу отметить, что существует несколько разновидностей цоликлонов:

• анти – А (представлен красной жидкостью);
• анти – В (синяя жидкость);
• анти – D (прозрачная жидкость).

Читайте также: Для чего необходим анализ крови на гемостаз и так ли это важно?

Первые два цоликлона необходимы для определения группы крови. А вот третий, представленный в этом списке помогает определиться с резус-фактором. Данные разновидности цоликлонов выпускаются в небольших прозрачных флаконах, объем которых составляет 5 или 10 миллилитров.

Хранить его можно на протяжении двух лет в темном, недоступном для детей месте. Приобрести такой флакончик можно практически в любой аптеке, при необходимости можно заказать его на складе.

Помните о том, что при определении группы крови и резус – фактора ни в коем случае нельзя смешивать данные цоликлоны. Брать их необходимо разными пипетками, обычно каждый из них продается с отдельной пипеткой. В случае, если вы смешаете цоликлоны, то группа крови будет определена неправильно и вам нужно будет еще раз повторить процедуру.

Как установить группу с помощью анти-А, анти-В и анти-D?

Для того, чтобы узнать группу крови, необходимо прежде всего подготовить все необходимое для этого. Поэтому вам понадобится:

• специальный планшет с семью небольшими лунками;
• три цоликлона: анти – А, анти – В и анти – D;
• три пипетки;
• изотонический раствор натрий хлора;
• шприц для забора крови;
• спирт;
• вата;
• жгут.

1. Начинать процедуру необходимо с забора крови. Обычно используют кровь, взятую из вены. Но в некоторых случаях применяют кровь из пальца. Набрав небольшое количество крови можно приступать к проведению самой процедуры.
2. Проследите за тем, чтобы температура воздуха в помещении, где будет проводиться процедура была не более 25 С. Начинать необходимо с нанесения по одной небольшой капле цоликлонов в лунки планшета.
3. В первую лунку капнуть цоликлон анти – А, во вторую анти – В и в ту, которая располагается сбоку поместить анти – D. Обратите внимание, что каждый вид цоликлона нужно наносить разными пипетками, чтобы они не имели возможности смешаться. В противном случае результаты нельзя считать достоверными и процедуру необходимо будет делать заново.
4. После этого необходимо добавить по одной капле крови к каждому цоликлону и аккуратно смешать две эти жидкости.
5. После этого нужно аккуратно раскачивать планшет на протяжении 3 минут.
6. Результаты можно будет наблюдать уже после 10 – 15 секунд, но для более достоверного результата необходимо подождать 3 минуты. Предварительные результаты можно определять по истечению этого времени. Однако после этого необходимо в каждую лунку добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия и смешать жидкости.
7. После этого нужно на протяжении 3 – 5 минут раскачивать планшетку и уже затем окончательно определять группу и резус – фактор.

Читайте также: Что такое ложноположительный анализ на ВИЧ? Диагностика и причины результата

При определении группы крови и резус-фактора вы сразу же обратите внимание на то, что под тремя ленками, которыми вы будете пользоваться находится еще три таких же. Они необходимы для повторного определения, если оно может понадобиться.

Существует всего 4 группы крови:

• I (0);
• II (А);
• III (В);
• IV (АВ).

После того, как вы смешаете цоликлоны с каплями крови и подождете около трех минут, вам необходимо будет приступать к определению результата. О том, какая группа крови в данном определенном случае будет свидетельствовать произошедшая реакция агглютинации. Это значит, что в определенной лунке эритроциты стали похожими на зернышки небольших размеров. А при добавлении в них изотонического раствора натрий хлора они не изменили свой начальный вид.

Как определить резус-фактор – алгоритм действий

Для определения резус – фактора необходимо выполнить практически те же действия, что и при определении группы крови.

1. Для этого необходимо добавить в третью лунку, находящуюся на планшете одну большую каплю цоликлона анти – Д и каплю.
2. Сюда сразу же добавить каплю крови, которая будет немного поменьше. Также само покачать планшет на протяжении трех минут и приступать к определению результатов.
3. После этого необходимо добавить в лунку каплю изотонического раствора натрий хлора и раскачивать планшетку на протяжении еще 5 минут.
4. После этого можно приступать к окончательному определению резус – фактора.

Стоит отметить, что существует два вида резус – фактора. Положительный и отрицательный, с помощью цоликлонов вы сможете определить, какой именно у вас.

Расшифровка результатов

В таблице представлены значения анализа для разных групп крови.

Достоверность

Метод определения группы крови и резус — фактора при помощи цоликлонов является достоверным и не имеет ошибок. Поэтому ему вы можете абсолютно полностью доверять. Он определит группу крови и резус безошибочно, поэтому применяется во всех странах.

Ошибки возможны лишь в тех случаях, когда вы неправильно выполнили процедуру. Возможно, что вы нарушили последовательность этапов или добавили слишком большое количество цоликлонов, а возможно, наоборот, маленькое. В любом из таких случаев процедура будет считаться неправильной. Вы это увидите тогда, когда примитесь за определение результатов.

Читайте также: Все об анализе крови на стерильность. Как сдать тест в Инвитро и других лабораториях?

Также результаты могут быть неверными не в случае вашей вины. Это может наблюдаться в тех случаях, когда цоликлоны были куплены просроченными. Также возможно, что в данном случае присутствует слабая способность эритроцитов к агглютинации.

Еще одним фактором, который способствует неверному определению относится слишком высокая температура воздуха в помещении, где проводится данная процедура. Помните о том, что она должна быть не более 25 С тепла.

Где сдать анализ и какова цена?

Сдать анализ и определить группу крови и резус – фактор при помощи цоликлоном можно, как в медицинской лаборатории, так и в стационаре отделения или поликлинике.

• В стационаре вам определят кровь по показаниям, если это необходимо.
• В медицинской лаборатории вы сможете сдать анализ на определение группы крови, а также резус – фактора тогда, когда вы этого захотите.

Существует большое количество разных лабораторий, которые занимаются проведением данного рода процедур. Одной из самых популярных медицинских лабораторий, которая занимается определением группы крови и резус – фактора при помощи цоликлонов является Invitro. Здесь у вас всего за несколько минут выполнят забор крови и проведут анализ.

Взятие крови из вены здесь обойдется вам в 575 рублей. Сюда входит взятие крови из вены – 200 рублей и определение группы – 375 рублей. Срок, в течении которого вам передадут результаты составляет всего сутки. Дополнительное определение резус – фактора обойдется вам в 375 рублей.

Помните о том, что знать свою группу крови должен каждый человек, который заботится о своем здоровье. Процедура определения не займет у вас слишком много времени, а ее проведение не требует много усилий. Для того, чтобы процедура была выполнена правильно, достаточно лишь ознакомиться с информацией, изложенной в данной статье.

Такая процедура потребует выполнения несложных последовательных действий, с применением цоликлонов Анти-A, анти-B, анти-D. Для проведения процедуры врачи – лаборанты рекомендуют применять одну определенную фирму сывороток.

Наиболее популярной, которая их производит, является Медиклон. Это одна из самых крупных компаний в России, которые занимаются производством реагентов. Также они занимаются производством всех необходимых дополнительных приспособлений, которые могут понадобиться при определении группы крови.

Цоликлоны – это группа специализированных антител, получаемых путем генетической инженерии. Ранее для их производства применялись специальные линии лабораторных грызунов. В организм животных вводился особый антиген, затем получали асцитную (внутрибрюшную) жидкость грызуна и специальными методами очищали ее. Это позволяло получить указанные антитела. Самые современные методы позволяют получать аналогичные антитела в клеточных культурах, без задействования лабораторных животных.

С позиции иммунологии цоликлоны относятся к антителам, направленным на острые реакции, то есть иммуноглобулинам М. При помощи этих белков можно провести реакции, сопровождающиеся формированием комплекса антиген-антитело, причем в качестве антигена выступают специфические мембранные белки, определяющие группу крови, а также Rh-фактор, располагающиеся на поверхности клеток крови.

Зачем назначается анализ

Одними из важных, обусловленных наследственно характеристик организма каждого человека являются резус-фактор и группа крови. Они не изменяются на протяжении всего срока жизни. Конкретная группа зависит от наличия или отсутствия определенных антигенов на клеточной мембране, а также биохимических параметров их жизнедеятельности.

Существует 4 распространенных группы, а Rh-фактор может присутствовать (+) или отсутствовать (-). Определение этих показателей особенно важно перед процедурой переливания крови. Ведь если человеку влить несовместимую кровь, это будет грозить смертельной опасностью. В результате иммунитет начнет интенсивно продуцировать антитела против перелитых эритроцитов. Поэтому важно определить антигенную совместимость перед проведением процедуры переливания.

Сейчас цоликлоны применяют в основном для точного определения группы и Rh-фактора пациента. Тестирование может осуществляться планово, по назначению специалиста, например, при поступлении в стационар, или экстренно, перед проведением гемотрансфузии.

В условиях поликлиник цоликлоны используют редко, обычно применяются сыворотки. Цоликлоны особенно полезны тогда, когда важна скорость проведения анализа или невозможно использовать обычные сыворотки.

Что такое цоликлон

Цоликлон является раствором моноклональных антигенов к специфическим мембранным белкам эритроцитов человека. Ранее для проведения исследований применялись агглютинирующие изоген-сыворотки. Применение цоликлонов позволяет повысить скорость, качество и точность анализа на определение группы биоматериала по системе АВО.

Современные цоликлоны являются продуктом гибридных клеточных линий, полученных путем слияния антителопродуцирующих лимфоцитов с клетками миеломы мыши. Генерируемые ими иммуноглобулины практически полностью повторяют структуру естественных антител. Клеточные колонии от первого клона, продуцирующие эти соединения, относятся к моноклональным, так как являются потомством единственной клетки. Также этим термином называются продуцируемые ими иммуноглобулины.

Получение таких колоний длительное время было сложнейшей задачей, так как необходимо было совместить возможность клетки вырабатывать огромное количество антител и способность к неограниченному размножению. Впервые это удалось выполнить в 1975 году, когда было получено слияние лимфоцитов и опухолевых клеток, размещенных в одной питательной среде. Соединившись с опухолевыми клетками (способными делиться бесконечно), лимфоциты передали им способность генерации нужных антител. Такие гибридомные колонии могут активно размножаться и вырабатывать в процессе жизнедеятельности нужные моноклональные антитела.

Как проходит процедура

Для осуществления тестирования с применением цоликлонов потребуется специальная поверхность – планшет для определения группы крови, сами пробы в жидком виде и собственно раствор цоликлонов. Для реакции подходит биоматериал, взятый из любых сосудов – как капиллярный, так и венозный или артериальный.

Алгоритм действий выглядит так:

1. Стороны планшета помечают, чтобы исключить ошибки с нанесением разных типов реагентов (во многих современных планшетах метки нанесены заранее).
2. Капают в лунку по одной капле цоликлонов и биоматериала. Важно, чтобы объем реактивов был примерно в десять раз больше количества использованной крови.
3. Ожидают 3–5 минут. В процессе ожидания осторожно покачивают планшет для обеспечения равномерного перемешивания жидкостей. Это предотвратит оседание эритроцитов по краям тестового образца, а также обеспечит лучшие условия для протекания реакции антиген-антитело.

Спустя три минуты можно провести оценку результатов или их отсутствия, что позволит с высокой надежностью определить групповую принадлежность биоматериала.

Расшифровка результатов

Исследование специфики антигенов эритроцитов и Rh-фактора является одной из рутинных процедур, которую проводят практически всем пациентам, проходящим лечение в условиях стационара. Анализ отличается простотой, процедура занимает не более 5 минут.

Таблица возможных сочетаний реакций антиген-антитело

Позитивная реакция проявляется в виде «склеивания» эритроцитов и оседания сформировавшихся скоплений клеток. В случае отсутствия реакции кровь остается жидкой, и форменные элементы не выпадают в осадок.

Как повысить точность исследования

Для обеспечения правильного протекания реакции и достижения высокой точности результатов нужно придерживаться ряда рекомендаций:

1. Цоликлоны требуется хранить в холодильнике, при температуре в диапазоне 2-8 °С. Крышка емкости должна плотно закрываться для предотвращения избыточного контакта с кислородом воздуха. Нарушение условий хранения может привести к потере антигенных свойств из-за разрушения сложных белковых молекул иммуноглобулинов.
2. Для проведения исследования запрещено применять реагенты с истекшим сроком годности (обычно составляет не более 1 месяца). Также недопустимо применение жидкостей, в которых появился осадок, посторонние включения или загрязнения.
3. Исследование нужно проводить в помещении, оборудованном качественным освещением, с температурой воздуха от 15 до 25 °С. Причем важна чистота, в воздухе не должны присутствовать пыль или другие загрязнения, способные привести к искажению результатов тестирования.
4. Нанося биоматериал и реагенты на планшет для определения группы крови, следует строго придерживаться рекомендованных пропорций. Если биоматериала будет больше, чем требуется, реакцию станет сложно дифференцировать, а при недостаточном объеме биоматериала она будет идти слишком медленно.
5. Недопустимо слияние капель крови, соединенных с различными цоликлонами. Если такая ситуация возникла, необходимо повторное проведение пробы. Также для смешивания реагентов с образцами биоматериала необходимо применять одноразовые палочки.

Важно учитывать, что реакция должна протекать около 3 минут. В сомнительных ситуациях возможно продолжение наблюдений перед оценкой результатов до 5–7 минут. Если с момента смешивания прошло более 10 минут, реакция считается недостоверной, так как за это время происходит подсыхание биоматериала и высока вероятность естественного выпадения форменных элементов крови в осадок. Достоверность такой пробы будет крайне низка.

Цоликлон – моноклональное антитело, образующееся путем генной инженерии. Чаще всего, для его получения используют мышей – животному вводят специальный антиген, а после получают асцитную жидкость грызуна, в которой и содержатся указанные антитела. Морфологически, они относятся к иммуноглобулинам класса М, т.е. антителам острой фазы. Механизм действия их обусловлен образованием комплекса антиген-антитело, где в качестве антигена выступают некоторые молекулы (в данной ситуации – белки, определяющие группу крови и ее резус), расположенные на мембране клетки.

Для чего проводится анализ?

Группа и резус-фактор – генетически обусловленные характеристики крови, которые наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении всей жизни человека. Классификация групп крови осуществляется, исходя из определенного набора биохимических параметров и состава антигенов, и насчитывает 4 основных группы. Переливание пациенту крови несовместимой группы или с другим резус-фактором несет с собой смертельную опасность – иммунная система начинает вырабатывать антитела против чужеродных клеток, которые атакуют и разрушают их. Именно по этой причине в ситуациях, которые несут с собой риск обширной кровопотери, необходимо точное определение принадлежности крови и резус-фактора как у донора, так и у реципиента.

Что такое цоликлоны?

Цоликлон — это солевой раствор моноклональных антигенам к антител эритроцитов человека. Моноклональные антитела для употребляют определения группы крови. Для их используют получения гибридомную технологию. Цоликлоны анти-А и созданы-В анти для определения групп крови системы человека АВО взамен стандартных изогем-сывороток агглютинирующих.

Цоликлоны анти-А и анти-В являются гибридомных продуктом клеточных линий, приобретенных в итоге мышиных слияния антителообразующих В-лимфоцитов с клеточками мышиной опухоль (миеломы костного мозга). Личные гибридомные продуцируют полосы гомогенные антитела только 1-го класса которые, иммуноглобулинов целиком схожи по структуре и био Антитела. активности, продуцируемые клеточками 1-го клона (потомство клеточки одной), являются моноклональными.

В антителах клеток одной специфики, происходящих из 1-го образует, лимфоцита клеточки 1-го клона. Главное заключается в нужно: последующем получить от одной клеточки специальные наработать и антитела их в огромном количестве. Трудность заключается в задач 2-ух преодолении: во-1-х, обычные клеточки после нескольких гибнут делений; во-2-х, только раковые клеточки способны плодиться неограниченно. Для решения этих 2-ух несопоставимых 1975 в заморочек году Г. Кёлер и К. Мильштейн сделали модификации клеточные, либо гибридомы. Гибридомы — это обычных слияние лимфоцитов в питательной среде с клеточками Лимфоциты. миеломы в этой среде не гибнут, а от миеломного получают напарника возможность нескончаемо плодиться. Подобным гибридомный, образом клан плодится, а в итоге этого образуются процесса моноклональные антитела.

Как проводится исследование?

Для определения группы крови с использованием цоликлонов необходима плоская ровная поверхность (планшетка), смоченная водой, набор химических реагентов и пробы биологической жидкости, причем специалист может использовать любую кровь: капиллярную, венозную, замороженную и т. д.

1. Стороны планшета помечают, чтобы не перепутать, на какую из них будет нанесен тот или иной тип цоликлонов.

   

2. На поверхность капают по одной капле реагентов (обычно цилоклоны анти-А и анти-В) и крови, причем объем химических веществ должен в 8-10 раз превышать объем биоматериала.
3. Подождать 3-5 минут, аккуратно покачивая планшет, чтобы жидкости хорошо смешались, а эритроциты не оседали по краям образцов.

Спустя несколько минут наступит реакция, по которой можно с высокой точностью определить принадлежность крови к определенной группе.

Расшифровка результатов

Определение группы эритроцитарных антигенов и резус-фактора давно стало одним из обязательных исследований для большинства пациентов, поступающих на стационарное лечение. Его проведение возможно на любом уровне оказания медицинской помощи при условии наличия необходимых реагентов и инструментов.

Обычно, определение группы проводится с помощью стандартных сывороток, хотя, конкуренцию ему составляет еще один метод, сходный по методике проведения с эталонным использование цоликлонов.

Цоликлон моноклональное антитело, образующееся путем генной инженерии. Чаще всего, для его получения используют мышей животному вводят специальный антиген, а после получают асцитную жидкость грызуна, в которой и содержатся указанные антитела.

Морфологически, они относятся к иммуноглобулинам класса М, т.е. антителам острой фазы. Механизм действия их обусловлен образованием комплекса антиген-антитело, где в качестве антигена выступают некоторые молекулы (в данной ситуации белки, определяющие группу крови и ее резус), расположенные на мембране клетки.

Таблица. Реакции разных групп крови с цоликлоном анти-А и анти-В.

Что следует учитывать при проведении анализа?

Чтобы результат анализа был максимально достоверным, при проведении процедуры необходимо соблюдать ряд условий:

• реагенты должны храниться в холодном месте при температуре +2-8 градусов во флаконах с плотно закрученной крышкой (в случае нарушения правил хранения они быстро теряют свои свойства);
• для проведения анализа нельзя использовать цоликлоны с истекшим сроком хранения (он составляет около 30 дней) или жидкости, которые содержат осадок, хлопья или мусор;
• исследование выполняется в хорошо освещенном помещении при температуре воздуха не ниже +15 и не выше +25 градусов, причем в нем не должно быть грязи, пыли и других факторов, способных исказить результат;

  

• при нанесении биоматериала и реагентов на поверхность планшетки следует точно соблюдать пропорции – если крови будет слишком много, реакцию сложнее отследить, а в противоположном случае (при малом объеме) она будет слишком медленной;
• нельзя допускать, чтобы капли крови, смешанные с разными типами цоликлонов, сливались вместе – если это случилось, исследование проводят заново; по этой же причине для смешивания реагентов с биоматериалом следует использовать разные палочки.

Продолжительность реакции должна составлять не менее 3 минут, а при сомнительном результате время наблюдения за образцами биоматериала следует продлить до 5 минут. Однако по истечении 10 минут может произойти подсыхание биоматериала и естественное выпадение эритроцитов в осадок, поэтому доверять такому исследованию не стоит.

Для чего необходим анализ?

В настоящее время цоликлоны используются преимущественно для определения группы крови и резус-фактора. Исследование может проводиться как планово, по назначению участкового врача-терапевта, так и по экстренным показаниям, когда требуется переливание крови (в ходе операции произошла массивная кровопотеря или пациент был доставлен с обширной травмой и массивным кровотечением). В поликлинике определение группы проводится преимущественно за счет использования сывороток.

Группа крови по цоликлонам определяется чаще всего в стационаре или специализированных лабораториях. К использованию цоликлонов прибегают, обычно, при невозможности использования сывороток. Скорость получения результатов несколько быстрее, чем при исследовании стандартными сыворотками, что делает методику более универсальной. Многие лаборатории стремятся перейти на использование данного метода.

Видео — Определения групп крови с помощью цоликлонов

1. Методика определения групп крови цоликлонами. Определение резус-фактора.

Цоликлоны
анти-А и анти-В предназначены для
определения группы крови человека по
системе АВО взамен стандартных
изогемагглютинирующих сывороток.
Антигены (агглютиногены) А и В определяются
с по­мощью цоликлонов. У доноров же
обязательно выявление не только
анти­генов (агглютиногенов) эритроцитов,
но и агглютининов ,в сыворотке (плазме)
с помощью стандартных эритроцитов

Цоликлоны
анти-А и -В представляют собой разведенную
асцитическую жидкость мышей-носителей,
в которой содержатся специфические
иммуног­лобулины, направленные против
антигенов А и В человека Неспецифиче­ская
полиагглютинация эритроцитов исключена,
так как в цоликлонах нет антител иной
специфичности. Метод надежен, время
наступления реакции агглютинации, её
выраженность выше, чем у изогемагглютинирующих
сы­вороток, особенно при слабо
выраженных антигенах эритроцитов.

Группа
крови по системе АВО определяется в
нативной крови, стабили­зированной
консервантами (глюгицир. цитроглюкофосфат,
гепарин и др.); в крови, взятой из пальца,
и без консерванта. Наиболее четкая
реакция агглю­тинации наблюдается
при высокой концентрации эритроцитов.
Производится эта процедура в помещении
с хорошим освещением при температуре
от +15 до +25°С ( см. приложение № I).
Перед определением группы крови
цоли­клоны необходимо растворить в
специальном растворе в течение 1-2 мин.
Растворенные цоликлоны хранятся при
температуре от +2
до
+8°С не белее трех месяцев. Для каждого
цоликлона необходимо иметь маркированную
пипетку. Определение групп крови
проводится одной серией цоликлонов На
планшет или пластинку наносится по
одной большой капле (0,1 мл) цоли­клона
под соответствующими надписями «анти-А»
и ‘»анти-В», Рядом с цоли-клоном
наносят исследуемую кровь по одной
маленькой капле, приблизи­тельно в
10 раз меньше капли цоликлона (0,01 мл).
Цоликлоны и кровь тща­тельно размешивают
стеклянной палочкой. Наблюдение за
реакцией прово­дится при покачивании
планшета в течение не более 2,5 мин.
Реакция в каж­дой капле может быть
положительной или отрицательной.
Положительная реакция выражается в
агглютинации (склеивании) эритроцитов.
Агглютинаты видны невооруженным глазом
в виде мелких красных агрегатов, быстро
склеивающихся и образующих крупные
хлопья, вплоть до одного большого
агглютината. При отрицательной реакции
капля остается равномерно окра­шенной
в красный цвет, агглютинаты в ней не
обнаруживаются. Агглютина­ция обычно
наступает в первые 3-5 с. Наблюдение
следует вести в течение 2.5 мин в виду
возможности более позднего наступления
агглютинации с эритроцитами, содержащими
слабые разновидности антигенов А или
В.

Возможные
результаты

1. Агглютинации
   нет ни с одним из цоликлонов — кровь
   принадлежит к группе 0(1) — эритроциты
   не содержат антигенов (агглютиногенов)
   А и В. но есть агглютинины а и в.

2. Агглютинация
   только в капле с цоликлоном анти-А,
   кровь принадле­жит к группе А(П). т.е.
   в эритроцитах есть антиген А,

3. Агглютинация
   есть только в капле с цоликлоном анти-В,
   кровь при­надлежит к группе В(Ш). то
   есть в эритроцитах есть антиген В.

4. Агглютинация
   есть в обеих каплях — кровь принадлежит
   к группе АВ (IV),
   исследуемые эритроциты содержат оба
   антигена (агглютиногена) А и В.

Rh-фактор
может быть определен в свежей крови,
консервированной крови, а также в
эритроцитах после сформирования сгустка
и отстаивания сыворотки.

Техника
определения: на дно пробирки вносят
одну каплю антирезусной универ­сальной
сыворотки, добавляют одну каплю
исследуемой крови или эритроцитов.
Про­бирку встряхивают и несколько
раз переворачивают, чтобы содержимое
растеклось по стенкам, что ускоряет
реакцию. Агглютинация наступает обычно
в течение минуты, но наблюдение следует
проводить не менее 3 минут. Для исключения
неспецифической аг­регации эритроцитов
в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического
р-ра и перемеши­вают путем 1-2 кратного
перевертывания пробирки, но не взбалтывают!

Результаты оценивают
визуально:

1.
Наличие агглютинации указывает на
Rh-положительную
кровь.

1. Отсутствие
   агглютинации свидетельствует о
   Rh-отрицательной
   принадлежности крови.

Соседние файлы в предмете Общая хирургия

• #
• #
• #