Инструкция по мытью лабораторной посуды

Мытье и обработка лабораторной посуды

Посуда
для бактериологических работ должна
быть чистой, а для многих исследований
— и стерильной, так как исполь­зование
загрязненной, плохо вымытой посуды
может привести к получению неправильных
результатов.

Для
мытья лабораторной посуды в
микробиологических лабораториях
отводится отдельное помещение — моечная,
или специальное рабочее место, которое
обеспечивается боль­шой раковиной с
подводкой горячей и холодной воды,
нагре­вательными приборами: газовой
или электрической плитой.

В
моечной необходимо иметь кастрюли,
тазы, ведра, ерши, щетки и доски с колышками
для сушки чистой посуды. На дно раковины
кладут густую металлическую сетку,
чтобы предупредить засорение
канализационной сети частицами агара,
ватой, бумагой, попадающими в воду при
мытье посуды.

Надписи,
сделанные на стекле восковым карандашом,
лег­ко снимаются щеткой либо кусочком
влажной марли с ме­ловым порошком или
содой.

Для
устранения налета белого цвета, нередко
появляю­щегося на стекле, посуду
помещают на 30—40 минут в 5—10% раствор
соляной кислоты.

Сильно
загрязненную посуду со следами жира
обрабатывают в хромовой смеси. Хромовая
смесь, будучи сильным окислителем,
разрушает органические вещества с
об­разованием растворимых или
газообразных продуктов. Перед употреблением
хромовую смесь подогревают до температуры
45—50°С, а затем заливают ею грязную
посуду. Работать с хромовой смесью
необходимо с осторожностью, в фартуке
и резиновых перчатках, после тщательно
промывать посуду.

Мытье
новой лабораторной посуды.
В ведре с теплой водой растворяют
хозяйственное мыло, чтобы образовалось
небольшое количество пены, погружают
в нее посуду и ста­вят на слабый огонь.
После 15-минутного кипячения посуду
вынимают, ополаскивают чистой водой,
погружают в теплый 1—2% раствор соляной
кислоты, доводят до ки­пения и вываривают
10—15 минут, чтобы нейтрализовать избы­ток
щелочи, который мог остаться при
изготовлении стекла. После кипячения
в кислоте посуду прополаскивают
водопроводной водой и дважды
дистиллированной.

При
мытье посуды, служащей для постановки
серологиче­ских реакций,
кислоты и щелочи использовать не
рекоменду­ется, так как даже следы
этих веществ, оставшиеся на стенках,
могут исказить результат реакции. Такую
посуду моют горячей водой, кладут на
сетки, чтобы с нее стекла вода, за­тем
несколько раз ополаскивают дистиллированной
водой и сушат в сушильном шкафу.

Мытье
лабораторной посуды, бывшей в употреблении.
По­суда, в которой содержался зараженный
материал, поступает в мойку после
предварительной дезинфекции, гарантирующей
гибель находящихся в ней патогенных
микробов. Перед мытьем из пробирок,
чашек и матрацев обеззараженную жид­кость
выливают в канализацию. Не очень
загрязненную посу­ду моют ершом в
горячей воде с мылом, содой или в растворе
горчицы. Посуду со следами агара, желатина
или другой питательной среды за сутки
перед мытьем заливают 2—2,5% раствором
едкого натра или едкого кали. Очень
загрязнен­ную жирную посуду, не
поддающуюся мытью обычным спо­собом,
заливают на 30—40 минут хромовой смесью,
а затем в течение продолжительного
времени промывают сначала проточной
водопроводной, затем — дистиллированной
водой.

Надежный
способ мытья и обеззараживания
лабораторной посуды предложен Г.П.
Кирсановым (1972). От­работанную
лабораторную посуду (пробирки, чашки
Петри, предметные стекла с мазками после
иммерсионной микроско­пии и пр.)
стерилизуют в автоклаве в течение 2 ч
при 2 атм. Далее посуду загружают в бак
и заливают рас­твором, содержащим на
100 мл дистиллированной воды 5 мл нашатырного
спирта и 3 г порошка для стирки
хлопчатобу­мажного и льняного белья.
Лабораторная посуда хорошо отмывается
и обезжиривается в течение 30 минут
кипячения в указанном растворе, затем
ее прополаскивают водопроводной водой
и дважды дистиллированной. После этого
посуду высушивают в сушильном шкафу.
Для обработки посуды, применявшейся
для выращивания микобактерий туберкулеза
на яичных питательных средах, А.В.
Ивановым и соавт. (1974) предложен простой
способ. Использованные пробирки со
средами автоклавируют при 1,5 атм в
течение 30 минут, затем по 250—300 штук
укладывают в бачки или эмалированные
ведра с плотной крышкой, заливают 1%
раствором едкого натра и кипятят 2 ч. Во
время кипячения остатки питательной
среды растворяются и образуется
однородная жидкая мыльно-ще­лочная
смесь, способствующая освобождению
пробирок от плотных остатков среды.
После 2 ч кипячения мыльно-щелоч­ной
раствор сливают для повторного
ис­пользования (раствор может быть
использован 3—4 раза). Прокипяченные
отмытые пробирки несколько раз
прополас­кивают водопроводной водой
и высушивают.

Посуду,
используемую для приготовления и
хранения пи­тательных сред и
культивирования микробов, нельзя
обраба­тывать дезинфицирующими
веществами, так как даже следы их делают
питательную среду непригодной для
размножения микроорганизмов.

Мытье
градуированных пипеток. Пипетки
и другая граду­ированная посуда,
поступающая для работы, должны быть
абсолютно чистыми и хорошо обезжиренными.
На стенках плохо обезжиренной посуды
при выливании жидкости остается большое
количество капель, вследствие чего
слитый объем жидкости не будет
соответствовать той величине, которая
указана на шкале деления.

Новые
градуированные пипетки, не бывшие в
употребле­нии, моют следующим образом.
С помощью резинового баллончика, надетого
на пипетку, насасывают в нее горячую
мыльную воду и затем погружают в сосуд
с такой же водой. Чтобы вода из пипеток
не вытекала, уровень жидкости в со­суде
должен соответствовать высоте пипеток.
Выдержав 20—30 минут в мыльном растворе,
пипетки прополаскивают водо­проводной
водой и переносят в 1—2% раствор соляной
кислоты, который постепенно доводят до
кипения. Далее пипетки обрабатывают
так же, как и остальную стек­лянную
посуду.

Пипетки,
бывшие в употреблении, тщательно
протирают тонкой упругой проволокой,
на конец которой плотно накручи­вают
кусочек ваты или марли в виде сливы. Для
того чтобы загрязнения снимались быстрее
и легче, пользуются горячей мыльной
водой, раствором питьевой соды или
стирального порошка.

Закупорившийся
канал пипетки прочищают тонкой проволокой
или мандреном от тонких игл шприцев.
Промытые пипетки складывают в таз,
заливают теплым раствором горчицы или
мыль­ной водой и ставят на слабый
огонь. После 20—30-минутного кипячения
пипетки вынимают и несколько раз
ополаскивают сначала теплой проточной,
а затем дистиллированной водой.

Сильно
загрязненные пипетки также очищают
вначале ершом с мылом или содой, а затем
погружают в хромовую смесь, налитую в
ванночку или банку, по высоте
соответству­ющую длине обрабатываемых
пипеток. В хромовой смеси пипетки
выдерживают 20—30 минут, затем в течение
несколь­ких минут промывают проточной
и дважды ополаскивают ди­стиллированной
водой.

Мытье
предметных и покровных стекол.
Предметные и по­кровные стекла должны
иметь абсолютно чистую поверхность и
быть хорошо обезжиренными. Капля воды,
нанесенная на обезжиренное стекло,
растекается равномерно, а на плохо
обезжиренном стекле распадается на
мелкие капельки. Пред­метные и покровные
стекла рекомендуется мыть и ополаскивать
в резиновых перчатках, чтобы не загрязнять
их жиром, находящимся на поверхности
кожи.

Стекла
предметные и покровные, не бывшие в
употребле­нии, моют в теплой мыльной
воде и после ополаскивания за­ливают
смесью Никифорова (этиловый спирт:эфир
в соотношении 1:1). Если стекла, выну­тые
через 2—3 дня из смеси Никифорова,
сохраняют следы жира, их складывают в
фарфоровую чашечку, заливают 2—5%
раствором гидрокарбоната натрия или
едкого натра, ставят на слабый огонь и
кипятят, считая от момента закипания
воды, в течение 20—30 минут. После кипячения
в щелочном растворе стекла ополаскивают
проточной водопроводной во­дой,
опускают на 10—15 минут в 5—10% раствор
соляной кислоты, и затем промывают
проточной и дистиллированной водой.

Предметные
и покровные стекла, бывшие в употреблении,
загрязненные краской и иммерсионным
маслом, обрабатыва­ют следующим
способом:

—
опускают на 2 ч в концентриро­ванную
серную кислоту или хромовую смесь, затем
тщатель­но промывают проточной
водопроводной водой;

— заливают 5% раствором
гидрокарбоната натрия или щелочи (едкое
ка­ли или едкий натр), ставят на слабый
огонь и кипятит в те­чение 30—40 минут.

Силиконирование
лабораторной посуды.
Тщательно вымы­тую и обезжиренную
посуду высушивают и заливают на несколько
минут при комнатной температуре 3%
раствором полиметилсилоксановой
жидкости (марка ПMC-200 или ПМС-300) в
хлороформе. При этом на поверхности
стекла образуется тончайшая
органосиликоновая пленка с хороши­ми
гидрофобными и адгезивными свойствами.
Жидкость мож­но использовать
многократно. Обработанную таким образом
посуду помещают на 2 ч в сушильный шкаф
при температуре 180—210°С, после этого
посуда готова к употреблению. Плен­ка
не смывается водой и не разрушается
кислотами. Для ее удаления посуду следует
в течение 2 ч кипятить в 10% рас­творе
щелочи.

Сушка
и хранение чистой лабораторной посуды.
Высушен­ную посуду просматривают на
свет. Стекло ее должно быть совершенно
прозрачным, без матового налета и пятен.

Вымытую
посуду не вытирают, а сушат при комнатной
температуре (холодная сушка) или горячим
воздухом в су­шильном шкафу при
температуре 100—105°C.

Чисто
вымытую и высушенную посуду, закрытую
пробками с бумажными колпачками или
без них, хранят в местах, на­дежно
защищенных от пыли, лучше всего в плотно
закрыва­ющемся шкафу.

Соседние файлы в предмете Микробиология

• #
• #
• #

ВЕРНУТЬСЯ К ПЕРЕЧНЮ ДОКУМЕНТОВ ❯
ПЕРЕЙТИ К ТРЕБОВАНИЯМ ГОСТ 17025 ❯

Документ создается сообществом лабораторий и открыт для дополнения и редактирования.

Вы можете участвовать в корректировке и дополнении, а также направить нам свою версию
документа для включения её в состав данного материала. Для этой цели используйте
форму загрузки
внизу страницы.

Данный материал будет полезен для разработки документнов системы менеджмента своей лаборатории.

ВЕРНУТЬСЯ К ПЕРЕЧНЮ ДОКУМЕНТОВ ❯
ПЕРЕЙТИ К ТРЕБОВАНИЯМ ГОСТ 17025 ❯

Лабораторная посуда — специальные и специализированные емкости различного конструктивного исполнения, объема, изготовленные из разнообразных материалов, устойчивых к агрессивным средам и обладающие необходимой термостойкостью, прозрачностью и другими нужными физическими свойствами.

Посуда для отбора, хранения и доставки проб – сосуды, изготовленные из толстостенного стекла или полимерных материалов (полиэтилен, полипропилен, поливинилхлорид, фторопласт и др.) с притертыми пробками или плотно завинчивающимися крышками.

Вода для лабораторного анализа — представляет собой прозрачную, бесцветную жидкость, используемую в лабораторных исследованиях для анализа химических веществ.

Органические растворители – индивидуальные химические соединения или их смеси, способные растворять различные вещества, то есть образовывать с ними однородные системы переменного состава двух или большего числа компонентов (петролейный эфир, ацетон, четыреххлористый углерод, спирты, гексан).

Окислитель – вещество, с помощью которого производится реакция окисления (серная кислота, азотная кислота, соляная кислота, хромовая смесь).

Способы очистки и мытья лабораторной посуды подразделяются на:

 — физические (кипячение, воздействие паром, холодом);

 — химические (с применением синтетических моющих средств, мыла, органических растворителей, окислителей);

 — механические (обработка с помощью щеток, ершей);

 — комбинированные.

 Мытье посуды для отбора проб и лабораторной посуды выполняется одним из способов (или несколькими сразу) в зависимости от типа и степени загрязнения, а также метода анализа.

Первичный, отмыв лабораторной посуды необходимо производить с использованием моющих средств. Химические моющие средства применяют, если обычные не дали результата. Повышение температуры усиливает моющий эффект любого средства.

При мытье посуды необходимо руководствоваться требованиями методик измерения, если в них даны указания по подготовке посуды для анализа (Например: для мытья химической посуды, используемой для исследования нефтепродуктов в воде: разрешается использовать концентрированную серную кислот, запрещается использовать для мытья соду, щелочи, все виды синтетических моющих средств, хромовую смесь;

 для мытья химической посуды, используемой для исследования АПАВ используется горячий этанол;

для мытья химической посуды на взвешенные вещества используется раствор соляной кислоты и т.д.).

Посуду, в которой была доставлена проба и в которой выполнялся анализ, необходимо мыть сразу по окончанию анализа, оставлять посуду загрязненной длительное время недопустимо.

Загрязненную посуду ополаскивают водопроводной водой, затем загрязнение удаляют ершиком с применением специальных средств (растворы синтетического моющего средства, хозяйственного мыла, жидкого мыла, органические растворители, хромовая смесь, концентрированные кислоты, щелочи). После специальных средств посуду тщательно промывают проточной водопроводной водой не менее 4-5 раз, с последующим ополаскиванием водой для лабораторного анализа.

Для упрощения процесса подготовки посуды и получения стабильных результатов рекомендуется по возможности для каждого вида исследований выделить свой комплект мерной и лабораторной посуды, которая не используется для других целей.

Для мытья посуды необходимо применять нейтральные моющие средства: жидкое моющие средство. Допустимо также использовать с этой целью нейтральные синтетические моющие средства, не содержащие биодобавок.

Для облегчения процесса мытья посуды после автоклавирования, обеззараженную посуду следует замочить в 1%-ном растворе моющего средства в горячей воде на 1-2 часа. Всю посуду тщательно промыть с помощью ершей и щеток. Ополоснуть от моющего средства в проточной водопроводной воде (8-10 раз при использовании моющего средства , и до 15 раз при использовании других порошков). Прополоскать в проточной воде для лабораторного анализа 3-4 раза. Высушить при комнатной температуре или в сушильном шкафу при температуре 80-100°С.

Перед мытьем обеззараженных пипеток из них удаляют «ватики», промывают водопроводной водой под давлением и кипятят в 1%-ном растворе бикарбоната натрия в течении 45 мин, многократно промывают водопроводной, затем дистиллированной водой. Высушивают, вставляют «ватики» и стерилизуют.

Новую посуду, предназначенную для бактериологических анализов, моют в 0,5%-ном растворе моющего средства, ополаскивают проточной водопроводной водой и кипятят в течение 15-20 мин в 1-2%-ном растворе соляной кислоты, затем ополаскивают водой для лабораторного анализа.

 Контроль чистоты посуды

Визуальный контроль чистоты посуды проводится по стеканию воды. Если вода стекает пленкой, равномерно смачивая изнутри стенки сосуда, значит, посуда вымыта достаточно хорошо. Если на стенках остаются висящие капли или образуются подтеки, то следует повторить обработку посуды.

Визуальному контролю подвергается 100% вымытой посуды.

Контроль чистоты мытья лабораторной посуды для микробиологического анализа осуществляют путем визуального наблюдения и выборочного проведения тестов.

Стекло вымытой и высушенной посуды должно быть прозрачным, без подтеков, пятен и посторонних включений. При ополаскивании вымытой посуды вода стекает равномерно со стенок флаконов, пробирок, по поверхности чашек и пр.

 Качество удаления синтетических моющих и моюще-дезинфицирующих средств оценивают по величине рН. Для этих целей используют рН-индикаторную бумагу с шагом измерительного диапазона не более 0,3 ед. Предварительно определяют рН воды, применяемой для ополаскивания посуды на конечном этапе. Контрольные измерения рН проводят путем прикладывания рН-индикаторной бумаги к поверхности вымытого мокрого стекла, прошедшего обработку. Для контроля произвольно выбирают от 3 до 10 ед. посуды.

Значение рН воды, полученной в результате контроля, должно соответствовать рН дистиллированной воды, применяемой для ополаскивания.

Сушка химической посуды

Различают следующие методы сушки посуды:

 — метод холодной сушки (без нагревания), высушивание на специальных штативах или стендах для посуды.

— метод горячей сушки (при нагревании), устройство для сушки посуды используется до полного высыхания посуды.

В бактериологической лаборатории для проведения иссле­дований, хранения реактивов, взятия и транспортирования биологических материалов и других задач используют самую разнообразную посуду. Она может быть изготовлена как из стекла, так и из различных полимерных материалов. Все чаще вместо традиционной стеклянной посуды используют пласти­ковую посуду промышленного изготовления (как правило, од­нократного применения и в индивидуальной упаковке).

Мытье и обработка лабораторной посуды. Посуда для бакте­риологических исследований должна быть чистой и в боль­шинстве случаев стерильной, так как использование загрязненной, плохо вымытой посуды может привести к получению искаженных или неправильных результатов. Пластиковая по­суда однократного применения, как правило, поступает в лабораторию чистой, в индивидуальной упаковке и в большин­стве случаев в стерильном виде. Следует ориентироваться на применение такой посуды для ежедневных работ. После использования и дезинфекции пластиковая посуда однократного применения подлежит утилизации.

Для мытья лабораторной посуды многократного примене­ния из стекла и пластмасс в микробиологических лабораториях отводят отдельное помещение – моечную комнату или специальное рабочее мес­то, которое оборуду­ется большой рако­виной с подводом го­рячей и холодной воды, нагревательными приборами – газовой или электрической плитой. В моечной комнате необходимо иметь кастрюли, тазы, ведра, ерши, щет­ки и доски (или пластины из поли­мерных материалов) с колышками для сушки чистой посуды. На дно раковины кладут густую металлическую или инертную полимерную сетку, чтобы предупредить засорение канализации частицами агара, ватой, бумагой, попадающими в воду при мытье посуды. Для мытья посуды может быть использована специальная моечная машина (рис. 5.1), которая также разме­щается в моечной комнате. Мытье лабораторной посуды в такой машине осуществляется в соответствии с инструкцией производителя используемой моечной машины.

В процессе мытья на посуду воздействуют химическими и механическими факторами. К числу последних относится уда­ление загрязнений с помощью щеток и ершей. При отсутствии ершей или невозможности их использования, например в случае несоответствия ерша размеру сосуда, посуду моют с помо­щью мелко нарезанных кусочков бумаги. При этом загрязне­ние, имеющееся на внутренних стенках, удаляется механичес­ки. Наилучшие результаты мытья посуды отмечаются в тех случаях, когда воздействие механических факторов сочетается с действием химических веществ. Поэтому ерши, которыми моют посуду, предварительно погружают в соду, полужидкое мыло, мыльный раствор или раствор моющего средства. Для мытья посуды не следует применять абразивные материалы, царапающие стекло, так как поцарапанное стекло утрачивает присущую ему прочность и во время стерилизации на месте едва заметных изъянов – царапин – могут образоваться трещины, посуда может разрушиться. Для мытья посуды необхо­димо применять нейтральные моющие средства, лучше всего жидкое моющее средство «Прогресс». Можно также использовать нейтральные синтетические моющие средства, не содер­жащие биодобавок (например, «Лотос», «Кристалл», «Эра»).

Надписи, сделанные на стекле восковым карандашом или маркером, удаляются щеткой либо кусочком влажной марли с меловым порошком или содой.

Для устранения налета белого цвета, нередко появляюще­гося на стекле, посуду помещают на 30–40 мин в 5–10 % раствор хлористоводородной кислоты.

Сильно загрязненную стеклянную посуду со следами жиро­вых отложений обрабатывают в хромовой смеси. Хромовая смесь, будучи сильным окислителем, разрушает органические вещества с образованием растворимых в воде или газообразных продуктов. Перед использованием хромовую смесь подогрева­ют до температуры 45–50 °С, а затем заливают ею загрязнен­ную посуду.

Мытье новой лабораторной посуды из стекла. Новую посуду из стекла перед использованием моют мыльной водой или 0,5 % раствором моющего средства. После этого посуду опо­ласкивают проточной водопроводной водой и кипятят в 1– 2 % растворе соляной кислоты в течение 15–20 мин. После кипячения в растворе кислоты посуду прополаскивают водо­проводной, а затем дистиллированной водой.

При мытье стеклянной посуды, предназначенной для поста­новки серологических реакций, кислоты и щелочи использо­вать не следует, так как даже следовые количества этих ве­ществ, оставшиеся на стенках, могут исказить результат реак­ции. Такую посуду моют горячей водой, кладут на сетки, чтобы из нее стекла вода, затем несколько раз ополаскивают дистиллированной водой и сушат в сушильном шкафу.

Мытье и обработка посуды, бывшей в употреблении. Загряз­ненная посуда, а также посуда, в которой содержался инфи­цированный материал, поступает в мойку после предваритель­ной дезинфекции, гарантирующей гибель находящихся в ней патогенных микроорганизмов. Загрязненная посуда помещает­ся в специальные биксы или ведра с крышками, после чего автоклавируется при 126 °С в течение 60 мин или при 132 °С в течение 20 мин. Нельзя освобождать от содержимого исполь­зованную посуду без предварительного обеззараживания. В ис­ключительных случаях допускается обеззараживание материа­лов кипячением в 2 % растворе пищевой соды или 0,5 % рас­творе нейтрального моющего средства в течение 60 мин с момента закипания. Кипячение в этом случае должно проис­ходить в закрытой емкости с полным погружением в раствор. Отработанные пипетки обеззараживают в высоком сосуде с полным погружением в дезинфицирующий раствор. Продол­жительность обеззараживания зависит от типа применяемого дезсредства.

При выборе методов обеззараживания следует руководствоваться СП 1.2.731–99 «Безопасность работы с микроорганизмами III–IV групп патогенности и гельминтами». Допускают­ся также к использованию новые дезинфицирующие средства, получившие разрешение Министерства здравоохранения РФ на применение. В этих случаях следует руководствоваться ре­комендациями производителя.

Перед мытьем из пробирок, чашек, матрацев и т.п. обезза­раженные материалы по возможности выливают в канализа­цию. Для облегчения дальнейшего процесса мытья после автоклавирования обеззараженную посуду замачивают в 1 % растворе моющего средства «Прогресс» в горячей воде на 1–2 ч, тщательно промывают при помощи щеток и ершей и ополас­кивают в проточной водопроводной воде (8–10 раз при ис­пользовании моющего средства «Прогресс» и до 15 раз при использовании других средств). Не слишком загрязненную по­суду моют ершом в горячей воде с мылом или содой. Посуду со следами агара, желатина или иных компонентов питатель­ных сред за сутки перед мытьем можно залить 2–5 % раство­ром едкого натра или едкого кали. Очень загрязненную жир­ную посуду, не поддающуюся мытью обычным способом, сле­дует залить на 30–40 мин хромовой смесью, а затем обильно промыть проточной водопроводной водой и ополоснуть дис­тиллированной водой (3–4 раза). Затем посуду сушат при комнатной температуре или в сушильном шкафу.

Мытье градуированной посуды. Градуированная посуда долж­на быть абсолютно чистой и хорошо обезжиренной. На стенках плохо обезжиренной посуды при вливании в нее жидкости остается большое количество капель, вследствие чего слитый объем жидкости не будет соответствовать той величине, кото­рая указана на шкале деления. Это особенно важно при мытье градуированных пипеток объемом 1–2 мл и менее.

Мытье новых, не бывших в употреблении, градуированных пипеток нужно проводить следующим образом. С помощью резинового баллона, надетого на пипетку, всасывают в нее горячую мыльную воду, а затем помещают пипетку целиком в сосуд с таким же мыльным раствором. Чтобы вода из пипеток не вытекала, уровень жидкости в сосуде должен соответство­вать высоте пипеток. Выдержав пипетки в мыльном растворе в течение 20–30 мин, их следует прополоснуть проточной водопроводной водой и перенести в сосуд с 1–2 % раствором соляной кислоты. Сосуд затем нужно поставить на слабый нагрев и постепенно довести раствор до кипения. Затем пи­петки обрабатывают аналогично остальной стеклянной посуде.

Перед мытьем бывших в употреблении обеззараженных пи­петок из них удаляют «ватики» (внутреннюю поверхность пи­петок можно протереть при помощи плотно накрученного на конец тонкой упругой проволоки кусочка ваты или марли в виде оливы, закупорившийся канал пипетки прочищают мандреном от тонких игл шприцев или тонкой упругой проволо­кой), промывают теплой водопроводной водой под давлением и кипятят в 1% растворе бикарбоната натрия в течение 45 мин, многократно промывают водопроводной, затем дистиллиро­ванной водой. После этого пипетки высушивают, вставляют новые «ватики» и, поместив в оберточную бумагу или пенал, стерилизуют в суховоздушном стерилизаторе.

Сильно загрязненные пипетки также очищают вначале ер­шом с раствором моющего средства или соды, а затем погру­жают в хромовую смесь, налитую в ванночку или высокий сосуд. Объем смеси по высоте должен соответствовать длине обрабатываемых пипеток. В хромовой смеси пипетки выдер­живают 20–30 мин, затем в течение нескольких минут промы­вают проточной и дважды ополаскивают дистиллированной водой.

Для наиболее ответственных работ можно также использо­вать импортные градуированные пипетки однократного при­менения из пластмасс. Такие пипетки, как правило, упакованы индивидуально и уже простерилизованы производителем при помощи ионизирующего излучения.

Мытье предметных и покровных стекол. Предметные и покров­ные стекла должны иметь абсолютно чистую поверхность и быть хорошо обезжиренными. Капля воды, нанесенная на обезжирен­ную поверхность стекла, растекается равномерно. Если же стекло недостаточно обезжирено, то капля распадается на мно­жество мелких капель. Предметные и покровные стекла реко­мендуется мыть и ополаскивать в резиновых перчатках, чтобы не загрязнять их жиром, находящимся на поверхности кожи.

Покровные и предметные стекла, не бывшие в употребле­нии, моют в теплой мыльной воде и после ополаскивания заливают смесью Никифорова. Если стекла, вынутые через 2–3 дня из смеси Никифорова, сохраняют следы жира, то их складывают в фарфоровую чашечку, заливают 2–5 % раство­ром гидрокарбоната натрия или едкого натра, ставят на слабый нагрев и кипятят в течение 20–30 мин после закипания. Затем стекла ополаскивают проточной водопроводной водой, опус­кают на 10–15 мин в 5–10 % раствор хлористоводородной кислоты и затем промывают проточной водой.

Предметные и покровные стекла, бывшие в употреблении и загрязненные краской и иммерсионным маслом, обрабаты­вают следующим образом:

• опускают на 2 ч в концентрированную серную кислоту или хромовую смесь, затем тщательно промывают проточной водопроводной водой;
• заливают стекла 5 % раствором гидрокарбоната натрия или щелочи (едкий натр или едкое кали), ставят на слабый нагрев и кипятят в течение 30–40 мин.

Силиконирование лабораторной посуды. Силиконирование посуды, пробок и т.п. осуществляют с целью придания поверхности посуды водоотталкивающих (парафиноподобных) свойств. Тщательно вымытую и обезжиренную посуду высуши­вают и при комнатной температуре заливают на несколько Минут раствором силиконовой эмульсии (например, КЭ-10-16, ПМС-200А или ПМС-400, с массовой долей силикона 0,05– 0,5 %). После этого жидкость сливают (силиконовую эмульсию можно использовать многократно) и подсушивают посуду в речение 20–30 мин при комнатной температуре. При этом на поверхности стекла образуется тончайшая органосиликоновая Пленка с хорошими гидрофобными свойствами. Обработанную таким образом посуду помещают на 1,5 ч в сушильный шкаф при температуре 120–140 °С. Затем промывают посуду дистил­лированной водой и сушат в течение 1,5 ч при указанных выше условиях. После этого посуда готова к использованию. Пленка не смывается водой и не разрушается кислотами. Для ее уда­ления необходимо в течение 2 ч кипятить посуду в 10 % рас­творе щелочи. Качество силиконирования во многом зависит от качества мытья посуды и ее обезжиривания. Работу по силиконированию посуды проводят в лабораторном вытяжном шкафу.

Обработка резиновых пробок. Новые пробки кипятят 30 мин в 2 % растворе бикарбоната натрия, многократно промывают горячей проточной водопроводной водой (кипячение и промы­вание проводят дважды). Затем пробки кипятят 30 мин в дис­тиллированной воде, промывают и высушивают.

Пробки, бывшие в употреблении, после кипячения в 2 % растворе бикарбоната натрия ополаскивают проточной водо­проводной водой, кипятят 30 мин в дистиллированной воде, ополаскивают дистиллированной водой, высушивают.

Резиновые пробки для флаконов заворачивают в крафт-бу­магу (или плотную упаковочную бумагу) либо фольгу и стери­лизуют автоклавированием.

Проверка качества мытья лабораторной посуды. Контроль чистоты мытья посуды осуществляют путем осмотра и выбо­рочного проведения тестов. Стекло вымытой и высушенной посуды должно быть прозрачным, без подтеков, пятен и по­сторонних включений. Перед сушкой для проверки чистоты посуды ее ополаскивают водой. Вода должна стекать, оставляя на поверхности стекла равномерную пленку. Плохо обезжирен­ную посуду обязательно моют повторно. Наличие остаточных жировых загрязнений может быть определено при помощи реактива, содержащего судан III (в 70 мл 90 % этилового спир­та, нагретого до 60 °С, растворяют по 0,2 г измельченной краски судан III и метиленового синего, затем добавляют 10 мл 20–25 % раствора аммиака, 20 мл дистиллированной воды и взбалтывают; такой раствор пригоден для использования в течение 6 мес.). Для этого внутреннюю поверхность вымытой и подсушенной посуды смачивают 3–5 мл красящего раствора, распределяют его по исследуемой поверхности в течение 10 с, затем быстро смывают обильной струей воды. На внутренней поверхности посуды не должно оставаться желтых пятен и подтеков.

При обработке и мытье стеклянной посуды используются моющие и дезинфицирующие средства, содержащие вещества, которые могут повлиять на рост микроорганизмов, поэтому контроль на наличие остаточных количеств моющих средств также имеет большое значение. Качество удаления моющих и моюще-дезинфицирующих средств оценивают по величине рН. Для этих целей используют рН-индикаторную бумагу с шагом измерительного диапазона не более 0,3 единицы. Предвари­тельно определяют рН воды, применяемой для ополаскивания посуды на конечном этапе. Контрольные измерения рН про­водят путем прикладывания рН-индикаторной бумаги к по­верхности вымытого мокрого стекла, прошедшего обработку. Для контроля произвольно выбирают 3–10 емкостей. Значение рН воды, полученное в результате контроля, должно соответ­ствовать рН дистиллированной воды, применяемой для опо­ласкивания.

При использовании нового моющего средства методика проверки качества мытья посуды от моющих средств и подбор режима мытья посуды осуществляется в соответствии со стандартом ИСО 9998:1991Е.

Сушка и хранение чистой лабораторной посуды. Вымытую посуду не вытирают, а сушат при комнатной температуре (хо­лодная сушка) или горячим воздухом в сушильном шкафу при температуре 80–105 °С. Для холодной сушки в лаборатории используются специальные доски из дерева или пластмассы с колышками, прикрепленными к ним под углом. Высушенную посуду просматривают на свет, поверхность стекла должна быть совершенно прозрачной, без матового налета и пятен.

Чисто вымытую и высушенную посуду, закрытую ватно-марлевыми (с бумажными колпачками или без них), резино­выми, силиконовыми пробками или металлическими крышка­ми-колпачками, хранят в местах, надежно защищенных от пыли. Для этих целей лучше всего подходят шкафы с плотно закрывающимися дверцами, ящики столов. Для размещения чистой сухой посуды на полках шкафов можно использовать фанерные ящики или клееные коробки из плотного картона, внутрь которых следует положить фильтровальную бумагу. По­суду также следует укрыть фильтровальной бумагой от попада­ния пыли и грязи.

Стерилизация и подготовка лабораторной посуды к использо­ванию. Лабораторную посуду (флаконы, пробирки, бутыли, колбы и т.п.) закрывают пробками, поверх которых надевают бумажные (или фольгированные) колпачки. Колпачки обвязы­вают вокруг горлышка ниткой или закрепляют резиновым кольцом. Перед стерилизацией чистую посуду при необходи­мости монтируют в крафт-бумагу (плотную оберточную бума­гу). Чашки Петри и пипетки стерилизуют, завернув в оберточ­ную или крафт-бумагу, либо в пеналах.

При выборе режима стерилизации специальной посуды и расходных материалов (флаконы с завинчивающимися проб­ками, металлические или силиконовые колпачки, выдержи­вающие автоклавирование, микробиологические пробки много­кратного применения и другие материалы) следует руководст­воваться рекомендациями производителя.

Стерилизацию посуды осуществляют сухим жаром в сушильном шкафу при 160 °С в течение 2 ч (или 180 °С в течение 60 мин) или текучим паром под давлением (1 атм) при темпе­ратуре 121 °С в течение 30 мин с последующим подсушиванием в сушильном шкафу при отсутствии в автоклаве вакуумной сушки.

После стерилизации посуду хранят до использования в за­крытом шкафу или ящиках с крышками не более 10 сут при ненарушенной упаковке или невскрытом пенале.

Контроль обсемененности лабораторной посуды для отбора проб. Цель – выборочный контроль качества подготовки посу­ды в отношении различных по устойчивости микроорганизмов, учитываемых при проведении анализа. При проведении кон­троля режимов суховоздушной стерилизации в полном объеме биологический, термический, химический) с рекомендуемой периодичностью контроль обсемененности стеклянных флако­нов для отбора проб в зависимости от объема стерилизуемых партий проводят не реже 1 раза в квартал. Контролю подвер­гаются все емкости, используемые для отбора проб: стеклян­ные многоразового использования после стерилизации, а также пластиковые одноразового использования, поступающие в сте­рильном виде от производителя. Контролируется общая обсемененность (стерильность) посуды и наличие спор сульфитредуцирующих клостридий.

Условия проведения испытаний в значительной мере обу­словливают качество данного вида контроля. В связи с этим его неотъемлемой частью является следующий комплекс меро­приятий:

• анализ проводят в боксе для разливки сред или в посевных комнатах (боксах);
• непосредственно перед исследованием проводят дезинфек­ционную обработку помещения (мытье бокса). После дез-обработки включают дополнительно бактерицидные лампы на 1,5–2 ч;
• спецодежду для проведения анализа (халат, шапочку, четырехслойную марлевую маску) стерилизуют. Режим стерили­зации спецодежды: автоклавирование при 120±1 °С в тече­ние 45 мин или при 132±2 °С в течение 20 мин.

Перед входом в бокс сотрудник, проводящий испытания, тщательно моет руки теплой водой с мылом и щеткой, выти­рает их стерильным полотенцем, надевает стерильный халат, шапочку, маску, надевает перчатки, обрабатывает их 70 % эти­ловым спиртом. При наличии ламинарного бокса исследование выполняют в спецодежде с использованием стерильных перча­ток.

Во время испытаний обязательно проводят контроль воздуха на обсемененность микроорганизмами.

Для каждого вида анализа отбирают не менее 1 % флаконов от общего количества партии простерилизованной посуды. Партией флаконов считают все флаконы, прошедшие стерили­зацию за один цикл работы одного стерилизатора.

В случае получения результата, свидетельствующего о не­стерильности хотя бы одного флакона, все партии флаконов, прошедшие обработку в данном стерилизаторе, бракуют. За­бракованные партии флаконов подлежат повторной стерили­зации. Выясняют возможные причины нарушения стерильнос­ти. Проводят комплексную проверку стерилизатора с одновре­менным использованием химического, термического (в 5 точ­ках) и биологического контроля.

При проведении контроля используются следующие мате­риалы:

• жидкая полноценная неселективная среда (питательный бу­льон, ГРМ-бульон и др.) проверенной ранее серии;
• плотная полноценная неселективная среда (питательный агар, ГРМ-агар и др.) проверенной ранее серии;
• железосульфитный агар, приготовленный согласно МУК 4.2.10181–01, либо зарубежные аналоги;
• стерильные чашки Петри диаметром 90 мм;
• стерильная водопроводная вода;
• спирт ректификат 96° для фламбирования;
• спирт ректификат 70° для дезинфекции.

Питательный бульон предварительно проверяют на стериль­ность. Для этого две пробирки от приготовленной партии бульона инкубируют при температуре 37 °С в течение 48 ч – учитывают наличие (отсутствие) пророста среды. При наличии пророста партию среды выбраковывают. Контроль стерильнос­ти питательного агара и железосульфитного агара проводят в процессе исследования путем постановки отрицательного кон­троля.

Контроль на общую обсемененность. В исследуемые флаконы вносят питательный бульон в количестве 20 % от объема флакона (например, во флакон 500 мл вносят 100 мл бульона). Флаконы закрывают стерильными резиновыми (силиконовы­ми) пробками. Переворачиванием или встряхиванием флако­нов трехкратно омывают всю внутреннюю поверхность флако­на, включая пробку. Инкубацию посевов проводят в этих же флаконах при температуре 37±1 °С в течение 48±2 ч. При ви­димом росте (помутнение бульона) в каком-либо флаконе ре­зультат учитывают как «не стерильно». При сохранении про­зрачности бульона проводят контроль пророста бульона: из каждого флакона отбирают по 1 мл содержимого, вносят в две Стерильные чашки Петри и заливают питательным агаром. Параллельно для контроля стерильности используемого пита­тельного агара стерильную чашку Петри заливают тем же пи­тательным агаром (отрицательный контроль). Чашки с посева­ми инкубируют при 37 °С в течение 48 ч. Наличие пророста при условии отсутствия роста микроорганизмов в отрицатель­ном контроле свидетельствует о нестерильности флакона. Ре­зультаты заносят в протокол исследования.

Контроль на наличие спор сульфитредуцирующих клостридий проводят при помощи мембранной фильтрации. В исследуемые флаконы вносят стерильную водопроводную воду в количестве 20 % от объема флакона, флаконы закрывают стерильными резиновыми пробками. Переворачиванием или встряхиванием флаконов трехкратно омывают (смачивают) всю внутреннюю Поверхность флакона, включая пробку. Фильтровальную уста­новку фламбируют, после чего производят фильтрацию 100 мл стерильной водопроводной воды (отрицательный контроль), затем через другой мембранный фильтр без дополнительного обжига установки фильтруют весь объем смыва с флакона. Дальнейшие исследования обоих фильтров (смыва и контроля) выполняют аналогично по схеме анализа на выявление спор сульфитредуцирующих клостридий согласно МУК 4.2.1018–01. Наличие роста колоний клостридий при отсутствии роста в отрицательном контроле свидетельствует о нестерильности флакона. Результаты заносят в протокол исследования.