Камера горяева инструкция для подсчета

Работа с камерой Горяева

Камера Горяева – оптическое устройство для подсчета клеток или иных соизмеримых с ними частиц в заданном объеме жидкости. Состоит из толстого предметного стекла, имеющего прямоугольное углубление (камеру) с нанесенной микроскопической сеткой и тонкого покровного стекла. Камера разработана профессором Казанского университета Горяевым Н.К. Благодаря увеличенному объему сетки отличается большей точностью подсчета, по сравнению с другими камерами (Тома, Цейса, Тюрка, Бюркера).

Технические характеристики камеры Горяева

Размеры малого квадрата камеры Горяева 0,05×0,05 мм
Размеры большого квадрата камеры Горяева 0,2×0,2 мм
Глубина камеры 0,1 мм
Объем жидкости под 1 малым квадратом 0,00025 мм3 (мкл) = 1/4000 мм3 (мкл)
Объем жидкости под 1 большим квадратом 0,004 мм3 (мкл) = 1/250 мм3 (мкл)
Объем камеры Горяева 0,9 мм3 (мкл)

Описание сетки камеры Горяева

Сетка камеры Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 малых квадратов.

Рис 1. Сетка камеры Горяева

Рис 2. Большой (1) и малый (2) квадраты сетки камеры Горяева

Рис 3. 225 больших квадратов сетки камеры Горяева

Рис 4. 100 больших квадратов сетки камеры Горяева

Рис 5. Большой квадрат камеры Горяева разделенный на 16 малых квадратов.

Обслуживание камеры Горяева

Между работой камера должна храниться в сухом месте. После работы камера дезинфицируется погружением на 30 минут в 70% раствор этилового спирта, или на 60 минут в 4% раствор формалина, после чего камера промывается дистиллированной водой и протирается мягкой салфеткой.

Правило подсчета клеток в квадрате (правило Егорова)

В квадрате считаются клетки, лежащие внутри его, а также касающиеся левой и верхней границ. Клетки, касающиеся правой и нижней границ при подсчете не учитываются.

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 20 раз 3–5% раствором уксусной кислоты с метиленовым синим (например, 20 мкл крови и 380 мкл р-ра уксусной к-ты). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать лейкоциты в 100 больших квадратах. Расчет числа лейкоцитов осуществляют, исходя из разведения крови (20) и числа больших квадратов (100), по формуле: X = (a×250×20) / 100, где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови; а – число лейкоцитов, посчитанных в 100 больших квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных лейкоцитов умножают на 50.

Методика подсчета эритроцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 200 раз в 0,9% растворе NaCl или растворе Гайема (берется 20 мкл крови и 4 мл раствора). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать эритроциты в 5 больших квадратах разделенных на 16 малых (т.е. в 80 малых квадратах). Рекомендуется считать клетки в квадратах, расположенных по диагонали. Расчет числа эритроцитов осуществляют, исходя из разведения крови (200) и числа малых квадратов (80), по формуле: X = (a×4000×200) / 80, где Х – число эритроцитов в 1 мкл крови; а – число эритроцитов, посчитанных в 80 малых квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных эритроцитов умножают на 10 000.

Лабораторная камера Горяева, названная в честь русского врача, профессора Казанского университета Горяева Н.К., является специальным монолитным предметным стеклом, предназначенным для подсчета количества клеток в заданном объеме жидкости. Кроме того, используя камеру Горяева можно определить увеличение микроскопа. Камеры Горяева широко применяются в области клинических и биомедицинских исследований.

Популярные области применение камеры Горяева:

• Подсчет форменных элементов крови
  • Подсчет эритроцитов
  • Подсчет лейкоцитов
  • Подсчет ретикулоцитов
  • И т.п.
• Подсчет форменных элементов мочи
• Исследование эякулята – оценка количественных и качественных параметров сперматозодиов
• Вычисление концентрации спор в вакцине
• Подсчет ооцист в препарате
• И т.п.

Камеры Горяева выпускаются в двух модификациях: двухсеточные (двухкамерные) и четырехсеточные (четырехкамерные). В определении цены камеры Горяева важную роль играет качество шлифовки стекла, метод нанесения сетки – лазерная гравировка или же вакуумное напыление.

Что собой представляет камера Горяева? Камера Горяева есть не что иное, как прозрачное монолитное предметное стекло поперечными прорезями и нанесенной специальным образом микроскопической сеткой. В случае двухкамерной камеры Горяева мы имеем четыре прорези, образующие три поперечно расположенных площадки, при этом средняя площадка разделена продольной прорезью на две одинаковых камеры, на каждой из поверхности площадки которых нанесена сетка. В случае же четырехкамерной камеры Горяева мы получаем предметное стекло с пятью прорезями, образующих четыре площадки, при этом две внутренние дополнительно разделены продольной прорезью для получения четырех камер с нанесенной микроскопической сеткой на поверхности площадок.

Рассмотрим более подробно особенности сетки. Специальная сетка наносится на внутренние площадки, расположенные ниже соседних боковых площадок на 0.1мм. Боковые площадки предназначены для притирания покровного стекла до появления Ньютоновских колец. Как правило, используют специальное покровное стекло для камеры Горяева с закругленными краями. После притирания покровного стекла создается камера, закрытая с двух боковых сторон, а с двух других остаются щели (так называемые, капиллярные пространства), через которые и заполняют камеру. Что конкретно представляет собой сетка? Микроскопическая сетка камеры Горяева расчерчена на большие и маленькие квадраты, сгруппированные различными способами. Сетка Горяева содержит 225 больших квадратов (15 рядов по 15 больших квадратов в каждом), разграфленных вертикально, горизонтально, крест-накрест и неразграфленных. При этом размеры малых делений клетки сетки составляют 0.05мм, а больших – 0.2мм. Важно, что малый квадрат со стороной 0.05мм во всех сетках является постоянной величиной. Не трудно рассчитать, что площадь малого квадрата равна 0.0025 мм2, а большого квадрата – 0.04мм2. Тогда получаем, что объем жидкости над квадратом, образованным большими делениями сетки Горяева, составляет 0.004 микролитра.

Подсчитав количество форменных элементов (ФЭ) над большим квадратом, можно подсчитать плотность данного типа клеток в суспензии по формуле:

X=M*2.5*10^5

где X — количество ФЭ/мл, M- количество ФЭ над большим квадратом.

При работе с камерой Горяева важно следить, чтобы ее рабочие поверхности оставались сухими и чистыми. Кроме того, при подсчете форменных элементов нельзя допускать наличие воздушных пузырей на сетке камеры, так как они могут мешать точности подсчета.

После работы с камерами Горяева следует выполнить их дезинфекцию одним из допустимых способов:

1. Погружение в 70%-ный раствор этилового спирта на 30 минут
2. Погружение в 4%-ный раствор формалина на 60 минут при комнатной температуре.

Приведем примеры применения камеры Горяева и некоторые формулы.

Практическое применение камеры Горяева

Прежде чем приступить к проведению лабораторных исследований, рекомендуется тщательно протереть камеру Горяева небольшим кусочком чистого бинта, слегка смоченного в спирте. Мы не советуем использовать для этих целей вату, так как она может оставить волокна. Таким же образом следует обработать и покровное стекло для камеры Горяева. Учтите, что при использовании низкокачественного спирта на поверхностях может образоваться осадок, тем или иным образом мешающий проведению исследований. Чтобы избежать появления связанных с этим явлением нежелательных эффектов, рекомендуется дополнительно протереть камеру и покровное стекло чистым марлевым шариком без спирта. Притирание покровного стекла к камере должно быть выполнено очень тщательно до появления на месте контакта радужных колец (так называемых, цветных колец Ньютона) с обоих краев. Для лучшего притирания можно воспользоваться одной хитростью и слегка выдохнуть воздух на камеру и покровное стекло, так чтобы небольшое количество влаги сконденсировалось на поверхностях стекол, что обеспечит лучший контакт.

При отсутствии специальных покровных стекол, прилагающихся к камере Горяева, можно использовать обычные стандартные покровные стекла.

Помимо целевого использования камеры Горяева для подсчета форменных элементов крови и т.п., данное стекло может расцениваться как своеобразный эталон для определения увеличения микроскопа. Для этого следует воспользоваться следующей формулой:

X=(p1-p2)/(a*N)

где X – это увеличение микроскопа; p1 – положение левой границы клетки камеры Горяева; p2 – положение правой границы клетки или группы клеток; N – количество клеток между измеряемыми границами; a — размер клетки камеры Горяева (равен 0,05 мм).

Камера Горяева также используется для подсчёта количества клеток в культуре.

Для подсчета клеточных элементов в жидкостях, содержащих их в меньших концентрациях, используются аналогичные по конструкции камеры Фукса-Розенталя и Нажотта, имеющие большую глубину – 0.2 мм и 0.5 мм соответственно. Эти же камеры используются в альгологии для количественного учета фитопланктона. Часто камера Фукса-Розенталя используется для подсчета форменных элементов спинномозговой жидкости. В отличие от камеры Горяева, большие квадраты сетки Фукс-Розенталя не разграфлены и сгруппированы по 16 квадратов, причем каждая такая группа ограничена тройными линиями.

Подсчет форменных элементов крови

Наиболее часто камеры Горяева используются именно для определения форменных элементов крови при проведении лабораторных исследований. Так для подсчета эритроцитов кровь необходимо развести в 200 раз, лейкоцитов – в 20 раз. Количество форменных элементов (ФЭ) в 1мкл крови определяют по формуле:

N=m*4000*s/q,

где N – искомое количество ФЭ в 1 мкл крови; m – число ФЭ в определенном количестве малых квадратов; q – количество малых квадратов сетки камеры Горяева, в которых подсчитывались ФЭ, s – степень разведения крови.

Формула для подсчета эритроцитов

Для подсчета эритроцитов используются 5 больших или 80 малых квадратов сетки, расположенных по диагонали. Таким образом, получаем следующую формулу:

N=m*4000*200/(5*16)=m*10000

Формула для подсчета лейкоцитов

Для подсчета лейкоцитов можно использовать один из трех методов:

1. Лейкоциты считают в 64 больших (пустых) квадратах

N=m*4000*20/(64*16)=m*78,125≈m*78

2. ​Лейкоциты считают по всей сетке в 169 больших квадратах (рекомендуется для образцов крови с выраженной лейкопенией)

N=m*4000*20/(169*16)≈m*29,6

3. Лейкоциты считают в 100 больших квадратах (64 пустых + 36 разграфленных квадратов по периметру сетки)

N=m*4000*20/(100*16)=m*50

Таблица нормальных значений:

Подсчет форменных элементов в мочевом осадке

Для определения ФЭ в мочевом осадке при анализах мочи по Нечипоренко, Аддис-Каковскому, Амбурже осуществляется по всей сетке Горяева и рассчитывается по формуле:

N=m/0.676,

где N – число ФЭ в 1 мкл осадка; m – число ФЭ, подсчитанных по всей сетке; 0.676 – объем камеры Горяева (мкл)

Автор статьи: Галина Цехмистро

Взятие крови на лейкоциты.

Устройство
камеры Горяева.

Камера
Горяева имеет 2 сетки, и это позволяет
одновременно произвести подсчет и
эритроцитов и лейкоцитов. Камера
изготовлена из толстого стекла, имеет
глубину 0,1мм и площадь сетки камеры –
9 мм ².

Подготовка
счетной камеры Горяева

• Протереть корпус
  камеры с сеткой и покровное стекло
  насухо

• Притереть
  покровное стекло к поверхности камеры
  Горяева до появления «радужных колец»
  (колец Ньютона)

• Пипеткой
  отобрать каплю разведенной крови из
  пробирки, предварительно перемешав
  содержимое и поднести пипетку к краю
  покровного стекла. Камера заполняется
  по принципу капиллярности.

• Кровь
  должна заполнить равномерно все
  пространство камеры с сеткой.

• Камеру
  оставляют на 1-2 минуты для оседания
  форменных элементов и затем производят
  подсчет с помощью микроскопа при малом
  увеличении (объектив х8, окуляр х10),
  конденсор опущен, диафрагма закрыта.

Источники
ошибок при подсчете форменных элементов
крови.

1. Образование
   сгустка. Взятие крови следует производить
   быстро и ловко, т.к. образование сгустка
   приводит к снижению количества
   форменных элементов.

2. Образование
   пузырька воздуха в счетной камере
   Горяева

3. Неправильное
   притирание покровного стекла искажает
   объем камеры и, следовательно, результат
   исследования.

4. К
   подсчету форменных элементов приступают
   через 1-2 мин после заполнения камеры

5. Недоброкачественность
   разводящей жидкости может привести
   к разрушению клеток

6. Недостаточное
   количество подсчитанных квадратов,
   нарушение техники подсчета в квадрате.

Подсчет лейкоцитов.

В
норме содержание лейкоцитов в 1 литре
крови составляет 4,0 – 9,0 х 10⁹/л.
Увеличение содержания лейкоцитов
называется лейкоцитоз, уменьшение
содержания – лейкопения.

Реактивы и
оборудование:

• 3% р-р уксусной
  кислоты

• центрифужная
  пробирка

• пипетка Сали

• пипетка на 1 мл

• камера Горяева.

Подсчет
лейкоцитов производят в 100 больших
пустых квадратах, что соответствует
1600 малым квадратам.

Расчет
количества лейкоцитов в 1 литре крови
производят, исходя из разведения крови,
числа сосчитанных квадратов, объема 1
малого квадрата по формуле:

Лейкоциты
= Х х
4000 х 20
х 10 ⁶

1600

где:
Х – это количество лейкоцитов, сосчитанных
в камере Горяева

10⁶
– коэффициент пересчета 1 мм³
на 1 литр крови.

Сокращенная
формула подсчета лейкоцитов в 1 литре
крови:

Лейкоциты
= Х х 50 х 10 ⁶/л

Клиническое
значение определения количества
лейкоцитов:

Лейкоцитоз
– наблюдается
при лейкозах, в детском возрасте, после
приема пищи, при воспалительных и гнойных
заболеваниях. Лейкопения
может быть
при лучевой болезни, циррозе печени,
метастазах рака, гипо – и апластической
анемии и у спортсменов при длительных
тренировках.

Приготовление мазков крови.

М
азки
крови делаются на чистых обезжиренных
стеклах. Для приготовления используют
шлифованное стекло, край которого должен
быть уже, чем ширина предметного стекла,
на котором готовят мазок.

Предметное
стекло захватывают за длинные ребра
большим и указательным пальцем правой
руки. Стерильным предметным стеклом
прикасаются к куполу капли крови на
расстоянии 1-1,5 мм от края стекла (не
следует прикасаться стеклом к коже
пальца). Затем стекло размещают на
поверхности стола, так чтобы капля крови
располагалась сверху и справа. Шлифованное
стекло располагают слева от капли под
углом 45 градусов, затем продвигают
вправо до соприкосновения с каплей
крови. Ждут, пока кровь распределится
вдоль шлифованного стекла. Затем быстро,
спокойно, не надавливая на предметное
стекло, продвигают шлифованное стекло
справа налево до тех пор, пока капля
крови не будет исчерпана.

Требования к
мазку крови:

1. Должен быть
   равномерной толщины

2. Должен быть
   желтоватого цвета

3. Должен
   заканчиваться «метелочкой, щеточкой»,
   т.е. неровно

4. Вся капля крови
   должна быть использована для мазка

5. Мазок должен
   занимать 3/4 стекла

6. Мазок должен быть
   полупрозрачен

7. Хороший мазок
   должен иметь бархатистую поверхность

8. Толстый,
   красный мазок непригоден для использования,
   т.к. форменные элементы в нем располагаются
   неравномерно и деформируются

9. В
   слишком тонком мазке трудно сосчитать
   необходимое количество лейкоцитов.

10. Полученный
    мазок подсушивают на воздухе, и затем
    подписывают с толстого края инициалы
    больного и регистрационный номер.

11. Для анализа делают
    не менее 2-х мазков.

Подсчет
лейкоцитарной формулы.

Лейкоцитарная
формула (лейкограмма)
– это процентное соотношение различных
форм лейкоцитов, подсчитанных в окрашенном
мазке крови.

Нормальные
показатели лейкоцитарной формулы:

Нейтрофилы:

Палочкоядерные
– 1 – 6 % Сегментоядерные
– 45 – 70 %

Эозинофилы
– 0-5%

Моноциты
– 2-9%

Базофилы
– 0-1%

Лимфоциты
– 18 – 40%

Этапы
исследования:

1. Изготавливают
   мазки крови (2 шт.)

2. Мазки
   фиксируют и окрашивают по методу
   Романовского (смесью азура и эозина)

3. Подсчет
   лейкоцитарной формулы проводят в
   окрашенном мазке с использованием
   микроскопа при большом увеличении
   (окуляр х10 (х7), объектив х90, диафрагма
   открыта, конденсор поднят) с использованием
   иммерсионной системы

4. Чтобы
   подсчитать лейкоцитарную формулу в
   мазке крови подсчитывается не менее
   100 клеток, если выявляется патологический
   процесс, то 200 – 400 клеток. Лейкоциты
   располагаются в мазке неравномерно:
   более легкие (лимфоциты) – в середине
   мазка, а более тяжелые (моноциты) – с
   краю.

5. Подсчет
   лейкоцитарной формулы начинают с
   тонкого края мазка, отступив 3-5 п/зр от
   края. Подсчитывают клетки от края до
   края поперек мазка, затем 5-6 п/зр по
   краю, и снова поперек и т.д. до 100 клеток.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

• #
• #
• #

  25.03.20151.33 Mб23Общие методы I Редакция ( ГФXII).rtf

• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #

Обновлено: 26.05.2023

Кол-во просмотров: 9664

Читать: 2 минут

Камера Горяева, по сути, это покровное стекло, на которое нанесены поперечные борозды. Борозды образуют сетку с клетками размером до 0.2 мм. Благодаря камере Горяева есть возможность получить форменные элементы в крови, моче.

Используется камера Горяева при подсчете сперматозоидов. Камеру используют также для получения технических характеристик микроскопов. Существуют двухкамерные и четырех камерные измерительные устройства.

Точность подсчета гарантируется новыми технологиями изготовления. Срок службы камеры существенно увеличивается из-за того, что здесь отсутствуют приклеенные элементы. Камера названа в честь русского врача, профессора Казанского университета Н. К. Горяева. Гематология как наука начала развиваться в России только в начале 20-го века. Будущий профессор получил обучение в Австрии и Германии. Длительное время Н. К. Горяев работал в микроскопической лаборатории Шридде. Большое внимание ученый уделял проведению гематологических исследований. Камера Горяева была в этих исследованиях своего рода прорывом, был увеличен ее объем, усовершенствована сетка. Подсчет составляющих крови велся более тщательно и точно. В настоящий момент камера используется для биомедицинских и клинических исследований.

Какие бывают особенности сетки

Сетка располагается ниже основных площадок. Для того чтобы тщательно протереть камеру используются боковые квадраты. Для того, чтобы покровное стекло использовалось максимально качественно применяются экземпляры с округленными краями. Сетка Горяева содержит 225 больших квадратов (15 рядов по 15 больших квадратов в каждом), неразгразграфленных и разграфленных. В процессе работы с камерами Горяева следует следить за тем, чтобы рабочие поверхности были сухими. Также на сетке камеры нельзя допустить появление пузырей, которые могут дать ошибку при подсчете.

Как подготовить камеру для проведения подсчетов

Техника проведения лабораторного исследования для подготовки сетки имеет решающее значение. Перед проведением подсчета необходимо высушить все поверхности камеры. Что касается покровного стекла, то его необходимо очистить до такой степени чтобы были видны характерные радужные кольца. Они получили название кольца Ньютона. Для протирания нежелательно использовать вату, так как после протирки могут остаться ее волокна. Тщательным образом выбирайте для протирки спирт. Некачественный спирт может давать осадок. Желательно протереть покровное стекло, чистой желательно новой, марлей, не используя спирт. Такой способ протирки более эффективный и не оставляет следов.

Подготовка камеры для работы играет важное значение, от этого зависит качество анализов, которые могут повлиять на диагноз больного. А значит на план лечения.

Кровяные клетки разные, вот почему для их подсчета форменных элементов используются разные реактивы. Однопроцентный раствор хлорида натрия используется для того чтобы подсчитать эритроциты. 0.02 мл крови смешивается с 8 мл хлорида натрия. Таким образом, кровь разбавляется в соотношении 1:400. Нередко это соотношение может быть большим. Для подсчета лейкоцитов используются уксусная кислота. Затем смесь помещают в пробирку и перемешивают. Камера должна заполняться очень аккуратно. Будет достаточно нескольких капель.

Эритроциты в камере подсчитываются в больших квадратах, которые по размерам равны 80-ти малым. Возможно неравномерное распределение крови. Чтобы этого избежать выбираются квадраты по диагонали. Клетки, которые расположены по краям предназначены для подсчета эритроцитов.

В нашем интернет-магазине вы можете приобрести широкий ассортимент камер Горяева и другого лабораторного оснащения по низким ценам. Обращайтесь!